新城疫病毒(AIV-U/NDV)试剂盒(双重荧光-PCR法)为上海沪峥主要产品，其特点灵敏性高 、特异性高，判断阴阳性结果标准，厂家供货，品质保证，价格优惠,欢迎来电咨询！

产品名称：新城疫病毒(AIV-U/NDV)试剂盒(双重荧光-PCR法)

英文名称：Diagnostic Kit for AIV-U/NDV) Gene DNA (Real-Time PCR Method)

包装：50T

预期用途】本试剂盒适用于检测/新城疫病毒(AIV-U/NDV)基因，用于筛查待检测植物中是否含有AIV-U/NDV)成分。其检测结果仅供参考。

【检验原理】本试剂盒用国家标准的 hLTF 特异性引物和探针，用荧光 PCR 技术进行转基因成分的检测。

【试剂组成】

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】-20℃避光保存、运输、避免反复冻融，反复冻融次数不超过 5 次。有效期 12 个月。

【适用仪器】ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】称取 200g 样品。

【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 0℃冰壶。

【使用方法】. 样品处理（样本处理区）样本前处理

固体样本：用粉碎机或冷冻研磨仪将样品研磨至细粉状。

2 DNA 提取

对于固体标本，DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推荐的方法：

1) 每个样品取 2 个平行管。称取 200mg 粉碎的样品，加入 1mL 预冷至 4℃的抽提液，剧烈摇动混匀后，在冰上静止 5min，4℃条件下 10000g 离心 15min，弃上清液；

2) 加入 600μL 预热至 65℃的裂解液，充分重悬沉淀，在 65℃恒温保持 40min， 期间颠倒混匀 5 次；

3) 室温条件下10000g 离心10min，取上清液转移至新离心管中，加入5μLRNAseA， 37℃恒温 30min，分别用等体积苯酚：异戊醇溶液和*：异戊醇溶液各抽提一次；

4) 室温条件下，10000g 离心 10min，取上清液至新离心管，加入三分之二体积的异丙醇，十分之一体积的 3mol/L 的乙酸钠溶液（pH=6.5），-20℃放置 2-3h；

5) 在 4℃条件下，10000g 离心 15min，弃上清液，用 70%乙醇洗涤沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀；

6) 加入 50μL TE（pH8.0）溶解沉淀，所得溶解即为样品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取试剂盒。

油脂样本请直接选用市售油脂 DNA 提取试剂盒，按说明操作。

试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。

将四个工作标准品的浓度输入，F1（FAM）和 F2(HEX)通道选择样点拟合法进行分析，F1(FAM)通道基线 （零点调整）取为 12—14 个循环的荧光信号，F2(HEX)通道基线（零点调整）取为 23—25 个循环的荧光信 号，噪声容限以基线超过正常阴性对照品扩增曲线（无规则的噪音线）的*点，或根据仪器噪音情况另行 调整,并且基线调整的位置在 0.5-5 的范围内，然后进行定量分析。 2 检测样本中 1×103 IU/ml≤HBV DNA≤1×108 IU/ml，测定结果有效，可直接报告阳性及相应的拷贝量； 3 检测样本中 HBV DNA＞1×108 IU/ml，即可直接报告为＞1×108 IU/ml，也可用正常人 HBV DNA 阴性血清按 10 倍梯度做相应稀释，使其拷贝量落在 1×105 —5×107 IU/ml 范围内再重新测定，测定结果应以稀释倍数进 行校正； 4 检测样本 HBV DNA 的拷贝量为 1×102 ~1×103 IU/ml 时，建议对该样本进行双份重试，如双份样本重试仍 在 1×102 ~1×103 IU/ml，则按实际值计算，如双份或一份重试均＜1×102 IU/ml，则判断为阴性； 5 Ct 值不显示时或 HBV DNA 的拷贝量＜1×102 IU/ml，该样本 HBV DNA 为阴性。

公司产品涵盖ELISA研发、PCR试剂盒，细胞培养，各种生化试剂、各种酶类、分子生物学试剂盒、培养基、自产实验室耗材、小型仪器等。此外、上海沪峥还代理了sigma,R&D,ScienCell,ATCC,wak0,omega，Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等国外各类*公司的产品。