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鸡传染性贫血病毒PCR检测试剂盒
物品单位 | 价格 | 品牌 |
---|---|---|
盒 | 2380 | 上海沪峥 |
- 产地:国内
- 型号:50T/盒
- 货号:HZT2455
- 发布日期: 2021-03-25
- 更新日期: 2023-05-31
产品详细说明
产地 | 国内 |
品牌 | 上海沪峥 |
货号 | HZT2455 |
用途范围 | 仅用科研 |
纯度 | 详询客服% |
CAS编号 | |
规格 | 50T/盒 |
是否进口 |
基本原理 先用随机引物将 RNA 反转录成 cDNA,然后设计特异性的引物和荧光探针(TaqMan 探针),进行 荧光定量 PCR 检测。TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针,它设计为与目标序列上游引物和下游引物 之间的序列配对。荧光基团连接在探针的 5’末端,而淬灭剂则在 3’末端。当完整的探针与目 标序列配对时,荧光基团发射的荧光因与 3’端的淬灭剂接近而被淬灭,但在进行延伸反应时, qTaq 聚合酶的 5’外切酶活性将探针进行酶切,使得荧光基团与淬灭剂分离,荧光强度得到检测。 随着扩增循环数的增加,释放出来的荧光基团不断积累,因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。
试剂盒准备物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数*个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
鸡病毒PCR检测试剂盒注意事项:
注意事项:
1. 试剂盒各组份使用前请充分融化并摇匀,离心管内的试剂需离心数秒后使用。 2 PCR操作各阶段应在不同实验室进行。
3 在试剂和标本准备阶段使用负压超净台。
4 应穿工作服,戴一次性手套(经常替换手套),使用一次性用品。
5 PCR操作人员应具有经验和受过培训。
6操作过程中用到的超净台、移液器、离心机、扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或70%乙醇或 紫外灯处理。
7 阳性对照应和待检标本平行进行操作后方可进行PCR扩增。