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貂源性成分(Martes)试剂盒(荧光-PCR法)
物品单位 价格 品牌
千克 1380 上海沪峥
  • 产地:国内
  • 货号:HXG731
  • 发布日期: 2021-03-29
  • 更新日期: 2021-03-29
产品详细说明
产地 国内
品牌 上海沪峥
货号 HXG731
用途范围 仅限科研
纯度 详询客服%
CAS编号
规格 50T/盒
是否进口


产品名称:貂源性成分(Martes)试剂盒(荧光-PCR法)
包装:50T
用途:本产品仅供科研与实验使用,不用于临床诊断等
目的:本试剂盒适用于检测疑似感染者或发病动物等组织、体液或淋巴结等标本中禽流感病毒rna,用于禽流感病毒感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
貂源性成分(Martes)试剂盒(荧光-PCR法)PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

鹿源性成分(Deer)试剂盒(荧光-PCR法)PCR 管中加入下列成分:

成份

样品

阳性对照

阴性对照

双酶一管式 RT-PCR Buffer

15 uL

15 uL

15 uL

EMCV 专一性引物对

2 uL

2 uL

2 uL

样品 RNA

1-5 uL

2 uL

EMCV 阳性对照

2 uL

补超纯水到

28 uL

28 uL

MMLV-Taq Mix

2 uL

2 uL

2 uL

鹿貂源性成分(Martes)试剂盒(荧光-PCR法)操作步骤

取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中, 8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 1.5mL 灭菌离心管中。

DNA 提取

样本 DNA 的提取采用 DNA 取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。试剂配制(试剂准备区)根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 10 份,多配制 1 ),每测试反应体系配制如下表:

试剂

Duck 反应液

酶液

用量

20μL

1μL

加样(样本处理区)将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。


PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25ul;荧光通道选择: 检测通道

Reporter Dye)FAM, 淬灭通道Quencher Dye)NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。

4.3 推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

结果分析判定设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出


现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline start (一般可在 3~15 范围内调节)、stop (一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold Value (上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

判断a) 检测通道 Ct ≤30,有 FAM 荧光信号检出,并出现典型的扩增曲线,判断样品为阳性。

b) 30≤35 时,且有典型的扩增曲线时,则需重复实验。再次扩增后检测体系的Ct 值仍≤35,且有典型的扩增曲线,则判定该样品含有相应的动物源性成分。当再次扩增后,检测体系 Ct 值>35,或无典型的扩增曲线,则判定该样品不含相应的动物源性成分。

质控标准

a) 空白对照:无FAM 荧光信号检出或 Ct ≥35,未出现典型的扩增曲线。

b) 阴性对照:无FAM 荧光信号检出或 Ct ≥35,未出现典型的扩增曲线。

c) 阳性对照:有 FAM 荧光信号检出,并出现典型的扩增曲线Ct 值<30。

d) 以上应同时满足,否则本次实验无效。


需要注意*:

PCR反应液请在冰中配制,然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法(Cool Start Method)与热启动法(Hot Start Method)相结合,更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应,增强PCR扩增的特异性,能得到良好的PCR结果。

PCR的反应条件:

因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。

◇ 循环次数

根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。

如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。


貂源性成分(Martes)试剂盒(荧光-PCR法)特点

1,严格的质控体系:所有试剂盒从原料到成品经过严格的质控,确保试剂盒质量及稳定性

2,产品不断优化,很好的灵敏度;

3,综合指标特性,研发便捷操作的试剂盒;

4,检测验证样本多样;

5,专业的研发团队为客户提供个性化的定*务;

6,提供食品安全药物残留Elisa试剂盒,以及快检试剂盒

7,完善专业的售前售后服务