- 上海沪峥生物科技有限公司
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- 地址:上海市,懿行路971弄
- 品牌:上海沪峥
- 产地:国内
- 货号:HXG731
- 价格: ¥1380/千克
- 发布日期: 2021-03-29
- 更新日期: 2024-11-14
产地 | 国内 |
品牌 | 上海沪峥 |
货号 | HXG731 |
用途 | 仅限科研 |
包装规格 | 50T/盒 |
纯度 | 详询客服% |
是否进口 | 否 |
产品名称:貂源性成分(Martes)试剂盒(荧光-PCR法)
包装:50T
用途:本产品仅供科研与实验使用,不用于临床诊断等
目的:本试剂盒适用于检测疑似感染者或发病动物等组织、体液或淋巴结等标本中禽流感病毒rna,用于禽流感病毒感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
貂源性成分(Martes)试剂盒(荧光-PCR法)PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
鹿源性成分(Deer)试剂盒(荧光-PCR法)在PCR 管中加入下列成分:
成份 |
样品 |
阳性对照 |
阴性对照 |
双酶一管式 RT-PCR Buffer, 2× |
15 uL |
15 uL |
15 uL |
EMCV 专一性引物对 |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
样品 RNA |
1-5 uL |
无 |
2 uL |
EMCV 阳性对照 |
无 |
2 uL |
无 |
补超纯水到 |
28 uL |
28 uL |
无 |
MMLV-Taq Mix |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
鹿貂源性成分(Martes)试剂盒(荧光-PCR法)操作步骤
取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中, 8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
DNA 提取
样本 DNA 的提取采用 DNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。试剂配制(试剂准备区)根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 10 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 |
Duck 反应液 |
酶液 |
用量 |
20μL |
1μL |
PCR 扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;
4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25ul;荧光通道选择: 检测通道
(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye)NONE,请勿选择 ROX 参比荧光。
4.3 推荐循环参数设置:
步骤 |
循环数 |
温度 |
时间 |
收集荧光信号 |
1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
55℃ |
30sec |
是 |
现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
判断a) 检测通道 Ct 值≤30,有 FAM 荧光信号检出,并出现典型的扩增曲线,判断样品为阳性。
b) 当 30
质控标准
a) 空白对照:无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35,未出现典型的扩增曲线。
b) 阴性对照:无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35,未出现典型的扩增曲线。
c) 阳性对照:有 FAM 荧光信号检出,并出现典型的扩增曲线,Ct 值<30。
d) 以上应同时满足,否则本次实验无效。
需要注意*:
PCR反应液请在冰中配制,然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法(Cool Start Method)与热启动法(Hot Start Method)相结合,更能有效地减少PCR过程中的非特异性反应,增强PCR扩增的特异性,能得到良好的PCR结果。
PCR的反应条件:
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小,设定25~30个循环。
如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,则会出现Smear。
貂源性成分(Martes)试剂盒(荧光-PCR法)特点
1,严格的质控体系:所有试剂盒从原料到成品经过严格的质控,确保试剂盒质量及稳定性
2,产品不断优化,很好的灵敏度;
3,综合指标特性,研发便捷操作的试剂盒;
4,检测验证样本多样;
5,专业的研发团队为客户提供个性化的定*务;
6,提供食品安全药物残留Elisa试剂盒,以及快检试剂盒
7,完善专业的售前售后服务