登革热病毒2型(DFV-II)试剂盒(荧光-PCR法)为上海沪峥PCR主要产品之一，产品优势 样品种类多，质控严格，高特异性，供货快，已被国内外广大科研工作者使用，被称谓：质量信得过产品
通用名称：登革热病毒2型(DFV-II)试剂盒(荧光-PCR法)

规格：50T/盒

英文名称：RSV-B Detection Kit (Real-Time PCR Method)

自备试剂：样品 RNA

【检验原理】

本试剂盒对登革热病毒2型(DFV-II)基因保守区设计特异性的引物和探针[1-3]，用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融不超过 5 次。有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g。

【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过 6 个月，标本运送应采用 0℃冰代。【使用方法】样品处理（样本处理区）

1.

实验步骤：

一、 样品RNA的抽提

二、 1. 取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。

三、 2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

四、 3. RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12 000 rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

五、 

六、 4. RNA清洗 移去上清液，每1 mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1 ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7 000 rpm离心5分钟。

七、 

八、 5. RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

九、 

十、 6. 溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。

实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。

主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。

主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

登革热病毒2型(DFV-II)试剂盒(荧光-PCR法)【注意事项】

1. 每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。
2. 所有试剂在要求温度下保存，尽量减少反复冻融，使用后的试剂应立即放回。
3. 本试剂盒为10头份量试剂，加样和反应程序严格按照说明书进行，由于操作失误、移液器不 、定时不准确造成无结果情况，不予负责。
4. 吸头、离心管和PCR管在使用前，应高压灭菌。
5. 注意防止试剂污染，在有效期限内用完。