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产地 | 国内 |
品牌 | 上海沪峥 |
货号 | HXG516 |
用途 | 仅限科研 |
包装规格 | 50T/盒 |
纯度 | 详询客服% |
CAS编号 | |
是否进口 | 否 |
戊型肝炎病毒(HEV)*试剂盒(荧光-PCR法)
本试剂盒用一对戊型肝炎病毒(HEV)特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对戊型肝炎病毒(HEV)进行体外扩增检测,用于对可疑感染者的病原学诊断。
【储存条件及有效期】
-20℃避光保存、运输、避免反复冻融,有效期12个月。
【适用仪器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
戊型肝炎病毒(HEV)试剂盒(荧光-PCR法)【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理
组织:取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆,匀浆后置入洁净的1.5ml离心管中;
液体标本:取适量标本13000rpm离心2min,弃上清。
1.2 DNA提取
1) 对上述处理好的标本加入40ul 核酸提取液,100℃恒温处理10分钟,13,000 rpm离心5分钟,取上清液转移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 试剂配制(试剂准备区)
根据代检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1
管阴性对照+1管阳性对照),体系配制如下表:
试剂
WSSV 反应液
酶液
用量(样本数为N)
20μl
1μl
3. 加样(样本处理区)
将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μl,加入相应的
反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
4. PCR扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;
5. 结果分析判定
结果分析条件设定
设置基线(baseline):一般情况下,对ABI 7500、7700等仪器设为6-15cycle,对PE5700设为3-15cycle,对MJ Research Option2设为6-12cycle。特殊情况可对基线适当调整。
设置阈值(threshold):以阈值线刚超过阴性对照扩增曲线(无规则的噪音线)的zui高点。
结果判断
阳性:检测样本Ct值小于等于35.0,且曲线有明显的指数增长期;
可疑:检测样本Ct值大于35.0且小于40.0,重复一次实验,如果Ct值仍小于40.0,且曲线有明显的指数增长期,为阳性,否则为阴性;
阴性:检测不到样本Ct值或Ct值为40。
试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。.
全能核酸酶在非常广泛的条件下,都能保持很高的稳定性和消化核酸的活性,这使其能够与多种细胞裂解液,如RIPA,或含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。例如:>100mM的盐酸胍会完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA会部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA会使活性丧失90%,1mM的PMSF则不会抑制核酸酶活性。 浓度<0.4%的Triton® X-100对核酸酶活性几乎无影响,<0.4%的脱氧胆酸钠使核酸酶可保持70%的活性,超过该临界值之后核酸酶活性会急剧降低,1%的浓度会使活性丧失70%;0.05%的SDS对核酸酶活性几乎无影响,而SDS浓度在0.1%-1%之间时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,可通过增加核酸酶的量使活性得到补偿。另外,核酸酶可耐受6M尿素,当尿素达到7M时,核酸酶在变性后活性会急剧降低,亦可通过增加核酸酶的量