【产品名称】

商品名称：禽脑脊髓炎病毒（AEV）检测试剂盒(荧光-PCR法)

【包装规格】50 份/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测的血清或血浆、疑似污染 AEV 的活病

毒疫苗等标本中禽网状内皮组织增殖病病毒 RNA，适用于禽网状内皮组织增殖病病

毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

禽脑脊髓炎病毒（AEV）检测试剂盒(荧光-PCR法)【检验原理】

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

水样便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

水样便 13000rpm 离心 2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；疑似污染的水直接取 100μL

1.2 DNA 提取

1) DNA 的提取也可以采用DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

本试剂盒用一对禽网状内皮组织增殖病病毒特异性引物，结合一条特异性荧光

探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对禽网状内皮组织增殖病病毒 RNA 进行体外扩

增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称 规 格

酶液 50μl×1 管

REV 反应液 1.0ml×1 管

REV 阳性质控品 50μl ×1 管

阴性质控品 250μl ×1 管

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

禽脑脊髓炎病毒（AEV）核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

1.2 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道 35 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35 值≤38， 且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

2. 质控标准

阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

一、 1. 取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。

二、 2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

三、 3. RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12 000 rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

【注意事项】

? 所有操作严格按照说明书进行；

? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

? 反应液应避光保存；

? 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

? 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

? 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。