产品分类
联系方式
  • 上海沪峥生物科技有限公司
  • 联系人:李小姐
  • 电话:021-20421762
  • 传真:021-68969289
  • 邮箱:869248833@qq.com
  • 地址:上海市,懿行路971弄
禽脑脊髓炎病毒(AEV) 试剂盒(荧光-PCR法)
  • 品牌:上海沪峥
  • 产地:国内
  • 型号:50T/盒
  • 货号:HZW6542
  • 价格: ¥2680/盒
  • 发布日期: 2021-02-19
  • 更新日期: 2024-03-01
产品详请
产地 国内
品牌 上海沪峥
货号 HZW6542
用途范围 仅用科研
规格 50T/盒

【产品名称】

商品名称:禽脑脊髓炎病毒(AEV)检测试剂盒(荧光-PCR法)


【包装规格】50 份/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测的血清或血浆、疑似污染 AEV 的活病

毒疫苗等标本中禽网状内皮组织增殖病病毒 RNA,适用于禽网状内皮组织增殖病病

毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

禽脑脊髓炎病毒(AEV)检测试剂盒(荧光-PCR法)【检验原理】

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

水样便取 0.5~1mL;疑似污染的食物取 1g

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

水样便 13000rpm 离心 2min,去尽上清;疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中;疑似污染的水直接取 100μL

1.2 DNA 提取

1) DNA 的提取也可以采用DNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。

本试剂盒用一对禽网状内皮组织增殖病病毒特异性引物,结合一条特异性荧光

探针,用一步法荧光 RT-PCR 技术对禽网状内皮组织增殖病病毒 RNA 进行体外扩

增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称 规 格

酶液 50μl×1 管

REV 反应液 1.0ml×1 管

REV 阳性质控品 50μl ×1 管

阴性质控品 250μl ×1 管

说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

禽脑脊髓炎病毒(AEV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

1.2 结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35 值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35 值≤38, 且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。


2. 质控标准

阴性质控品:Ct 值>38 或无 Ct 值;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

一、 1. 取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。

二、 2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

三、 3. RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12 000 rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

【注意事项】

? 所有操作严格按照说明书进行;

? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

? 反应液应避光保存;

? 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

? 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

? 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。