产品名称： 禽流感病毒H3亚型检测试剂盒

检测方法： 实时荧光 PCR

规    格： 50T

保存方式： 2~8℃

有 效 期： 1年

产    地： 中国

用    途： 仅用于科研实验

订购流程：禽流感病毒H3亚型检测试剂盒

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ELISA常见问题：禽流感病毒H3亚型检测试剂盒

利用ELISA进行检验常见的样本一般包括血液（指血，静脉血），尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等，这些样本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。

1、抗原：ELISA抗原有三类：液体中纯化的自然抗原、合成抗原和基因重组抗原。

纯度不高可导致试剂盒的特异性不强，合成抗原一般都是多肽抗原，

试剂盒一般为基因重组抗原。抗原纯度不高，特异性就不强，

2、抗体特异性和亲和力的大小会影响试剂盒的特异性和敏感性

3、酶结合物，试剂盒的保存时间通常由酶的稳定性决定。

最常用的就是辣根过氧化酶-HRP.其他还有碱性磷酸酶和β半乳糖苷酶。

ELISA温浴和洗涤一般为磷酸盐缓冲液（PBS）

碱性磷酸酶的话就不能用PBS洗涤了，因为残留的PBS会抑制一半的酶活性。

TMB显色液取代了OPD为HRP最常用的色原底物。为氧化还原反应（OPD对机体有突变作用，所以改用TMB）

我们的优势：禽流感病毒H3亚型检测试剂盒

1，严格的质控体系：所有试剂盒从原料到成品经过严格的质控，确保试剂盒质量及稳定性

2，产品不断优化，很好的灵敏度；

3，综合指标特性，研发便捷操作的试剂盒；

4，检测验证样本多样；

5，专业的研发团队为客户提供个性化的定*务；

6，提供食品安全药物残留Elisa试剂盒，以及快检试剂盒

7，完善专业的售前售后服务

操作步骤
1  病毒 RNA 的提取
1.1  取已处理的样品、阴性对照和阳性对照，分别加入裂解液 600 μL，充分颠倒混匀，室温静置 3～

5 min。

1.2  将液体吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免离心时 堵塞吸附柱），13000 rpm 离心 30 s。

1.3  弃去收集管中液体，加入 600 μL 洗液，13000 rpm 离心 30 s。

1.4 重复步骤 1.3。

1.5 弃去收集管中液体，13000 rpm 空柱离心 2 min，以除去残留的洗涤液。

1.6  将吸附柱移入新的 1.5 mL 离心管中，向柱中央加入洗脱液 50 μL，室温静置 1 min，13000 rpm

离心 30 s，离心管中液体即为模板 RNA。

2  实时荧光 RT-PCR 操作
设被检样品、阴性对照和阳性对照总和为 N，则反应体系配制如下： 试剂 体系



无菌无核酸酶水 2.7（N+1）μL

RT-PCR 反应液 10（N+1）μL

酶混合液 0.4（N+1）μL

荧光探针 1.9（N+1）μL



将以上配制的反应体系充分混匀后，分装每个反应管中各 15 μL。

分别取 5 μL 模板 RNA，加入相应反应管中，混匀并作好标记，在荧光 PCR 仪上进行以下反应：

45 ℃ 15 min，95 ℃ 1min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，在每个循环第二步（60℃ 35s）收集荧光信号，共

40 个循环。（报告基团“FAM”，淬灭基团“None”）。

结果判定
1 结果分析条件设定 阈值设定原则：阈值线设定于刚好超过阴性对照扩增曲线的点。不同仪器可根据仪器噪音

情况进行调整。

2  结果描述及判定

阳性对照 Ct 值≤30 并出现特定的扩增曲线，阴性对照无 Ct 值并且无特定扩增曲线，实验结果成 立；被检样品 Ct 值≤30 并出现特定的扩增曲线为 AIV 阳性；被检样品 30＜Ct＜37 并出现特定的扩 增曲线，需重新取样提取 RNA，扩增后进行结果判定，如仍是可疑，可判定为阳性；被检样品 Ct 值≥37 时，超过本方法检测灵敏度范围，判定为阴性；对于某些未呈现 S 型曲线，但本底较高的样 品，应为阴性。