产品名称：对虾白斑综合症病毒(WSSV)检测试剂盒(实时荧光PCR法)

包装规格】50T/100T

【储存条件及有效期】2~8℃，有效期为12个月。

产品简介】

　　本产品基于恒温核酸扩增技术，在恒温条件下对对虾白斑综合症病毒(WSSV)特异基因片段进行扩增及检测，并针对各种样品进行反应体系的优化，可在极短时间内给出准确的检测结果。

· 可检测样本

水产活体：亲虾、虾苗、鱼类、贝类、蟹类

产品特点】

快速检测：60分钟内完成检测，实时荧光检测仪可判读结果。

特异性强：针对靶基因的6个区段设计引物，保证扩增特异性。

灵敏度高：比传统PCR灵敏度高。

操作简单：一步加样后，65℃恒温条件下即可完成扩增。

对虾白斑综合症病毒(WSSV)检测试剂盒(实时荧光PCR法)【检验原理】

本试剂盒根据对虾白斑综合症病毒(WSSV)基因组设计特异性引物和探针，用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称 规 格

核酸提取液 1.5mL×2 管

酶液 50μL×1 管

反应液 1.0mL×1 管

阳性质控品 50μL×1 管

阴性质控品 250μL×1 管

注：

1）不同批号试剂不能混用。

2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀猪，取分泌物、血液、*、扁桃体、*和淋巴结等

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1.样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；全血样本：待血凝固后，取血清 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

1.2DNA 提取

1)对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000

rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2)DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒

（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2.试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂 ASFV 反应液 酶液

用量（样本数为 N） 20μL 1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

3.加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4.PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）

NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。

5.2结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。

阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。

对虾白斑综合症病毒(WSSV)检测试剂盒(实时荧光PCR法)【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行；

试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀幵短暂离心；

反应液应避光保存；

反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服；

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，幵按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理