上海沪峥专业生产销售猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户咨询认购。

产品详细信息

名称：猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒现货

规格： 20T/50T

品牌：上海沪峥

【用途】用于猪传染性胃肠炎病毒病的检测、诊断和流行病学调查。

【操作步骤】

1.RNA提取  

(1)取疑似猪传染性胃肠炎病毒病的病料（空肠、小肠及其内容物等），用Hank’s液或PBS研磨成1：3悬液，在－20 ℃反复冻融3次，经3 000 r/min离心5 分钟，上清液再经12 000 r/min离心15分钟，上清液－70 ℃保存备用。

(2)取200uL上清液（或标准品Ｔ），移入新的1.5mL灭菌EP管中，加入400uLSR-I，反复颠倒几次混匀，室温放置5~10分钟。

(3)加入200uL氯仿，漩涡振荡15秒混匀。室温下放置2~3分钟。

(4)12000r/min离心10分钟，取上层水相(注意：切勿吸取到里两相之间的杂质)，转移到一个新的EP管中，再加入等体积异丙醇混匀，室温放置10分钟。

(5)12000r/min离心10分钟，弃去上清，加入SR-II 700uL，充分洗涤沉淀RNA后，12000r/min离心5分钟，小心吸去上清（注意：严格防止RNA丢失）。

(6)用洁净吸水纸吸干管壁的SR-II，室温放置2~3分钟。用20uLTU-5溶解，即为模板，即用或-70℃冻存备用。

72℃延伸

 3.PCR操作

 4.电泳

   称量0.25g琼脂糖，放入锥形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×浓缩液，储存备用），于微波炉中熔解，加入1.5μl的TU-9混匀。封闭好电泳槽，加入梳子，倒入琼脂凝胶，待凝固后，将PCR产物6μl混合1.5μl TU-7，加样于凝胶孔中，同时在相邻孔加入3μlTU-8，在100v 电压下，1×TAE液中电泳30分钟，在紫外成像仪下观察结果。

【结果判定】

    在342bp（猪放线杆菌胸膜肺炎）及841bp（副猪嗜血杆菌）位置出现扩增带，实验结果为阳性

猪传染性胃肠炎病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒

【注意事项】

1. 每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。

2. 所有试剂在要求温度下保存，-20℃保存试剂尽量减少反复冻融，使用后的试剂立即放回，避免在室温搁置太久。

3. 尽量建立PCR试验操作区，避免交叉污染。

4. 加样和反应程序严格按照说明书进行，由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况，不予负责。

5. 吸头、离心管和PCR管在使用前，要高压灭菌，操作过程尽量不要用手接触到管内壁，可用镊子夹取。

6. 注意防止试剂污染，在有效期限前用完。