原代冻存或复苏培养，复苏时间1-2周，保证细胞纯度在98%以上，同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌.

人胚肾细胞，293(HEK-293)产品信息

细胞简称:293T/17

中文名称:人胚肾细胞

种属:人

培养基条件:DMEM（高糖） + 10% FBS+1% P/S

特性:贴壁

形态：上皮细胞样

来源：ATCC

规格: 1ml/T25

运输保存:采用干冰保存运输

细胞用途：仅供科研使用

培养操作规程仅供参考

准备好培养基及培养冻存条件及冻存液。

细胞培养简介：

原代培养

原代培养是指将细胞从组织中分离后,使其在合适的条件下増殖直到占据所有可用基质

（即:达到汇合状态）的培养阶段。在此阶段,必须将细胞转移到新的容器中并更换新鲜 培养基，从而对细胞进行传代培养，为其提供更多继续生长的空间。

细胞株

如果将细胞系的一个亚群通过*或者其他方法从培养物中明确地选择出来，则此细胞

系就成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比,细胞株往往会获得其他一些遗传学 改变。

细胞系

*传代培养后,原代培养物即被称为细胞系或者亚来自于原代培养的细胞系

寿命有限（即:有限细胞系，见下文），随看细胞的传代，生长能力*的细胞会占据优

势,最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。

细胞培养条件：

各种细胞的培养条件相差很大，但是细胞培养的人工环境必须包括合适的容器，容器中 含有一定的基质或介质，为细胞提供必需的莒养素（氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物 质）、生长因子、激素和气体（02、C02）,并可调节其物理化学环境（pH、渗透压、温度）。 大多数细胞均具有贴壁依赖性，必须贴附在固体或半固体基质上培养（贴壁或者单层培养）， 而另一些细胞则可在培养基中漂浮生长（悬浮培养）。

传代培养过程

细胞处理

复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。 天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，*的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。

人胚肾细胞购买细胞注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件.

6. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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