小鼠抗凝血酶受体(ATR)ELISAkit试剂盒价格优惠*上海沪峥！您做实验的*伙伴！

英文名称：Mouse anti-thrombin receptor,ATR ELISA kit

小鼠抗凝血酶受体(ATR)ELISAkit试剂盒价格优惠标本收集:
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA，标本采集后30分钟内于 1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。
3. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
4. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
5.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃电冰箱内，避免反复冻融，1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。
6. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品*值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。
试验所需自备物品:
1.  酶标仪(450nm波长滤光片)
2.  高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl
3.  37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水
4.  吸水纸
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液。(加热温度不要超过50℃)使用时洗涤液应为室温。
3.  标准品: 加入标准品&标本稀释液1.0ml至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀(浓度为5000 pg/ml)。然后根据需要进行倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。样品稀释液直接作为空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml )5000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配制100-200μl。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配制  100-200μl。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

小鼠抗凝血酶受体(ATR)ELISAkit试剂盒价格优惠实验步骤：

1.标本的采取和保存:

可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。

2.试剂的准备:

按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

3.加样:

在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。

4:保温:

在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。

5.洗涤:

洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELISA是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相。

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