猪内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA*上海沪峥！您做实验的*伙伴！

英文名称：PoFAine Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA kit

猪内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA实验步骤：

标本收集:
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA，标本采集后30分钟内于 1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。
3. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
4. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
5.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃电冰箱内，避免反复冻融，1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。
6. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品*值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。
试验所需自备物品:
1.  酶标仪(450nm波长滤光片)
2.  高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl
3.  37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水
4.  吸水纸
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液。(加热温度不要超过50℃)使用时洗涤液应为室温。
3.  标准品: 加入标准品&标本稀释液1.0ml至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀(浓度为5000 pg/ml)。然后根据需要进行倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。样品稀释液直接作为空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml )5000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配制100-200μl。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配制  100-200μl。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

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