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禽传染性喉气管炎(AiLTV)检测试剂盒(荧光-PCR法)
  • 品牌:沪峥生物
  • 产地:国内
  • 型号:50T/盒
  • 货号:HXG459
  • 价格: ¥2380/盒
  • 发布日期: 2021-03-25
  • 更新日期: 2024-07-19
产品详请
产地 国内
品牌 沪峥生物
货号 HXG459
用途 仅用科研
规格 50T/盒

实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程, 通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

【使用方法】

1.样品处理(样本处理区)

样本前处理:

取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g,手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中, 8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。

2.DNA 提取

DNA 的提取采用DNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2.1试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

2.3步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号

1 1 cycle 95℃ 10min

2 40 cycles 94℃ 15sec

55℃ 30sec

3结果分析判定

3.1结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

3.2判断

a)检测通道 Ct 值≤30,有 FAM 荧光信号检出,并出现典型的扩增曲线,判断样品为阳性。

b)当 30

4.质控标准

a)空白对照:无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35,未出现典型的扩增曲线。

b)阴性对照:无FAM 荧光信号检出或 Ct 值≥35,未出现典型的扩增曲线。

c)阳性对照:有 FAM 荧光信号检出,并出现典型的扩增曲线,Ct 值<30。

d)以上应同时满足,否则本次实验无效。



【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行;检验过程中,参照《GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测》的规定进行。

试剂盒内各种组分使用前应自然融化,混匀并短暂离心;

反应液应避光保存;

反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全   通则》进行处理。