心病毒(SAFV)试剂盒(荧光-PCR法)为上海沪峥PCR主要产品之一，产品优势 样品种类多，质控严格，高特异性，供货快，已被国内外广大科研工作者使用，被称谓：质量信得过产品
通用名称：心病毒(SAFV)试剂盒(荧光-PCR法)

规格：50T/盒

英文名称：EV-71 Detection Kit (Real-Time PCR Method)

自备试剂：样品 RNA

【检验原理】

本试剂盒对心病毒(SAFV) 基因保守区设计特异性的引物和探针[1-3]，用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。

【储存条件及有效期】

-20℃避光保存、运输、避免反复冻融，有效期12个月。

【适用仪器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰代。

结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道 35值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35值≤38， 且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

质控标准

阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。

2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据马动脉炎病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。

6. 本产品只能用于科研

7.．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

运输及保存： 低温运输，2-8℃保存，保存期限为12个月。

心病毒(SAFV)试剂盒(荧光-PCR法)样本提取操作

1. 取 200μL 处理好的样本（不足 200μL，可以加入 PBS 缓冲液或者生理盐水补足 200μL），加入 500μL

裂解液，振荡 30 秒，室温静止 2 分钟。注：针对   难裂解样本，室温静置时间可延长至5 分钟。

2. 把上述混合液转移到吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免阻塞吸附膜），10000rpm 离心 1 分钟，弃去套管中液体。

3. 向吸附柱中加入 500μL 去蛋白漂洗液，12000rpm 离心 30 秒，弃去套管中液体。

4. 向吸附柱中加入 500μL 洗涤液，12000rpm 离心 30 秒，弃去套管中液体。

5. 向吸附柱中加入 500μL 洗涤液，12000rpm 离心 30 秒，弃去套管中液体。

6. 12000rpm 再次离心 2 分钟。

7. 把吸附柱转移至新的 1.5mL 灭菌离心管中，向吸附柱中加入 50μL 洗脱液，并于室温温育 2 分钟。

8.12000rpm 离心 1 分钟，弃去吸附柱，1.5mL 灭菌离心管中液体即为 DNA/RNA 溶液。提取的 DNA/RNA

可直接用于各种下游应用试验，如不立即使用，请于-80℃保存。

【注意事项】

?所有操作严格按照说明书进行；检验过程中，参照《GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测》的规定进行。

?试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；

?反应液应避光保存；

?反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

?使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

?样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；