单纯疱疹病毒(HSV)试剂盒(荧光-PCR法)

规格：50T/盒

英文名称：HSV Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】50T/盒

自备试剂：样品 RNA

【检验原理】

本试剂盒对单纯疱疹病毒(HSV)基因保守区设计特异性的引物和探针[1-3]，用荧光 PCR 技术对核酸进行体外扩增检测，从而达到快速检测之目的。

【储存条件及有效期】

-20℃避光保存、运输、避免反复冻融，有效期12个月。

【适用仪器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰代。

结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道 35值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35值≤38， 且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

质控标准

阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程， 通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

单纯疱疹病毒(HSV)试剂盒(荧光-PCR法)样本提取操作

1. 取 200μL 处理好的样本（不足 200μL，可以加入 PBS 缓冲液或者生理盐水补足 200μL），加入 500μL

裂解液，振荡 30 秒，室温静止 2 分钟。注：针对   难裂解样本，室温静置时间可延长至5 分钟。

2. 把上述混合液转移到吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质，以免阻塞吸附膜），10000rpm 离心 1 分钟，弃去套管中液体。

3. 向吸附柱中加入 500μL 去蛋白漂洗液，12000rpm 离心 30 秒，弃去套管中液体。

4. 向吸附柱中加入 500μL 洗涤液，12000rpm 离心 30 秒，弃去套管中液体。

5. 向吸附柱中加入 500μL 洗涤液，12000rpm 离心 30 秒，弃去套管中液体。

6. 12000rpm 再次离心 2 分钟。

7. 把吸附柱转移至新的 1.5mL 灭菌离心管中，向吸附柱中加入 50μL 洗脱液，并于室温温育 2 分钟。

8.12000rpm 离心 1 分钟，弃去吸附柱，1.5mL 灭菌离心管中液体即为 DNA/RNA 溶液。提取的 DNA/RNA

可直接用于各种下游应用试验，如不立即使用，请于-80℃保存。