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牛鼻炎病毒通用PCR检测试剂盒
  • 品牌：上海沪峥
  • 产地：国内
  • 型号：50T/盒
  • 货号：HZT2347
  • 价格： ￥2280/盒
  • 发布日期： 2021-03-16
  • 更新日期： 2024-10-22
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产地 国内
品牌 上海沪峥
货号 HZT2347
用途 仅用科研
包装规格 50T/盒

牛病毒通用PCR检测试剂盒

基本原理 先用随机引物将 RNA 反转录成 cDNA，然后设计特异性的引物和荧光探针(TaqMan 探针),进行 荧光定量 PCR 检测。TaqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它设计为与目标序列上游引物和下游引物 之间的序列配对。荧光基团连接在探针的 5’末端，而淬灭剂则在 3’末端。当完整的探针与目 标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与 3’端的淬灭剂接近而被淬灭，但在进行延伸反应时， qTaq 聚合酶的 5’外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离,荧光强度得到检测。 随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累，因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。

试剂盒准备物品：
清理液（A）                                    毫升
染色液（t B）                                  微升
稀释液（C）                                    毫升
溶解液（tD）                                   毫升
产品说明书                                       1份
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

牛病毒通用PCR检测试剂盒
1．基础程序。
2．扩增温度和延伸温度。
3．反应时间。
4．循环次数。
5．PCR 反应液的配制。
6．PCR技术的基本原理。
7．PCR的反应动力学。
8．PCR扩增产物。
9．PCR反应体系与反应条件。


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