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牛副流感病毒3型PCR检测试剂盒
物品单位 价格 品牌
2380 上海沪峥
  • 产地:国内
  • 型号:50T/盒
  • 货号:HXG549
  • 发布日期: 2021-03-16
  • 更新日期: 2023-01-29
产品详细说明
产地 国内
品牌 上海沪峥
货号 HXG549
用途范围 仅用科研
纯度 详询客服%
CAS编号
规格 50T/盒
是否进口

检验原理】
本试剂盒用牛副流感3型特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对对牛副流感3型DNA进行体外扩增检测,用于对可疑感染者的病原学诊断。
【储存条件及有效期】
-20℃避光保存、运输、避免反复冻融,有效期12个月。
【适用仪器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用0℃冰壶。
【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理
组织:取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆,匀浆后置入洁净的1.5ml离心管中;
液体标本:取适量标本13000rpm离心2min,弃上清。
1.2 DNA提取
1) 对上述处理好的标本加入40ul 核酸提取液,100℃恒温处理10分钟,13,000 rpm离心5分钟,取上清液转移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 试剂配制(试剂准备区)
根据代检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1
管阴性对照+1管阳性对照),体系配制如下表:
试剂
WSSV 反应液
酶液
用量(样本数为N)
20μl
1μl
3. 加样(样本处理区)
将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μl,加入相应的
反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
4. PCR扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;


试剂盒准备物品:
清理液(A)                                    毫升
染色液(t B)                                  微升
稀释液(C)                                    毫升
溶解液(tD)                                   毫升
产品说明书                                       1份
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数*个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。