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牛腺病毒3型(BAV-3)试剂盒(荧光-PCR法)
物品单位 价格 品牌
1380 上海沪峥
  • 产地:国内
  • 货号:HXG548
  • 发布日期: 2021-02-26
  • 更新日期: 2022-06-07
产品详细说明
产地 国内
品牌 上海沪峥
货号 HXG548
用途范围 仅限科研
纯度 详询客服%
CAS编号
规格 50T/盒
是否进口

牛腺病毒3型(BAV-3)试剂盒(荧光-PCR法)为沪峥生物主要产品,沪峥生物坚守品质、锐意进取,满足于每一位老师的实验要求,厂家供货,品质保证,价格优惠,欢迎来电咨询!

规格:50T/盒

本试剂盒用牛腺病毒3型(BAV-3)特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对牛腺病毒3型(BAV-3)进行体外扩增检测,用于对可疑感染者的病原学诊断。

【储存条件及有效期】


-20℃避光保存、运输、避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
【保存和运输】

牛腺病毒3型(BAV-3)试剂盒(荧光-PCR法)样品处理(样本处理区)

1. 样本前处理

组织样品:每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g,手术剪剪碎混匀后 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm 离心 2min,取上清液 100μL 1.5mL 灭菌离心管中

1.2 DNA 提取

1) DNA 的提取也可以采用 DNA 提取试剂盒(离心柱提取法),请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

APP 反应液

酶液

用量(样本数为 N)

20μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中,21uL/管。

3. 加样(样本处理区)

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25μL;

荧光通道选择: 检测通道(Reporter Dye)FAM, 淬灭通道(Quencher Dye) NONE,ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择 None 即可。

4.3 推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline start (一般可在 3~15 范围内调)、stop (一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性:检测通道 Ct 值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道 35≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为 35≤38, 且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

6. 质控标准

阴性质控品:Ct 值>38 或无 Ct 值;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值≤32; 以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7. 检测方法的局限性

? 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

? 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

? 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

? 病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

? 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

? 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定 量检测不准确的结果;

? 本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

【注意事项】

? 所有操作严格按照说明书进行;

? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

? 反应液应避光保存;

? 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

? 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

? 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。




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