絮状支原体（Mycoplasma Flocculare）和猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）都是存在于猪呼吸道的传染性细菌，根据抗原组合物和基因组分析判断，这两种支原体亲缘关系较近。猪肺炎支原体是猪的地方性肺炎的病原体，而絮状支原体一般是非致病性的，可能在猪肺炎支原体侵袭机体时造成机会感染。这两种支原体有着与大多数支原体不同的特征，即很难培养和在固体培养基上的菌落外观不是典型的“煎蛋”样子。絮状支原体大小和形状不是固定不变的，特别是在生长后期。在生长稳定和趋向下降阶段，可发现细丝状细胞，这种细胞形状在猪肺炎支原体中不存在。

由于絮状支原体不引起疾病，虽然在猪群中分布广泛，但检测方法很少，主要还是体外培养法，耗时较长。使用PCR法可以对絮状支原体进行检测，灵敏度高，且检测时间短，仅需几个小时即可获得结果。

絮状支原体PCR检测试剂盒选取了16S rRNA基因的一段序列进行PCR鉴定，引物经BLAST验证为特异性靶向絮状支原体，与其他生物的基因组无交叉反应。使用本试剂盒检测了絮状支原体、猪肺炎支原体、猪滑液支原体（Mycoplasma Hyosynoviae）和猪鼻支原体（Mycoplasma Hyorhinis）等共19个菌株和分离株，只有絮状支原体产生特异性扩增条带。可见本试剂盒具有物种特异性，可用于絮状支原体的鉴定和检测。

絮状支原体PCR检测试剂盒【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

组织：取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆，匀浆后置入洁净的1.5ml离心管中；
液体标本：取适量标本13000rpm离心2min，弃上清。
1.2 DNA提取

1) 对上述处理好的标本加入40ul 核酸提取液，100℃恒温处理10分钟，13,000 rpm离心5分钟，取上清液转移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2. 试剂配制（试剂准备区）

根据代检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1

管阴性对照+1管阳性对照），体系配制如下表：

试剂

WSSV 反应液

酶液

用量（样本数为N）

20μl

1μl

3. 加样（样本处理区）

将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μl，加入相应的

反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；

5. 结果分析判定

絮状支原体PCR检测试剂盒结果分析条件设定
设置基线（baseline）：一般情况下，对ABI 7500、7700等仪器设为6-15cycle，对PE5700设为3-15cycle,对MJ Research Option2设为6-12cycle。特殊情况可对基线适当调整。
设置阈值（threshold）:以阈值线刚超过阴性对照扩增曲线（无规则的噪音线）的zui高点。
结果判断
阳性：检测样本Ct值小于等于35.0，且曲线有明显的指数增长期；
可疑：检测样本Ct值大于35.0且小于40.0，重复一次实验，如果Ct值仍小于40.0，且曲线有明显的指数增长期，为阳性，否则为阴性；
阴性：检测不到样本Ct值或Ct值为40。

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。.