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絮 状支原体PCR检测试剂盒
物品单位 价格 品牌
千克 280 上海沪峥
  • 产地:国内
  • 货号:HZT2137
  • 发布日期: 2021-03-01
  • 更新日期: 2021-03-01
产品详细说明
产地 国内
品牌 上海沪峥
货号 HZT2137
用途范围 仅限科研
纯度 详询客服%
CAS编号
规格 50T/盒
是否进口

絮状支原体(Mycoplasma Flocculare)和猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)都是存在于猪呼吸道的传染性细菌,根据抗原组合物和基因组分析判断,这两种支原体亲缘关系较近。猪肺炎支原体是猪的地方性肺炎的病原体,而絮状支原体一般是非致病性的,可能在猪肺炎支原体侵袭机体时造成机会感染。这两种支原体有着与大多数支原体不同的特征,即很难培养和在固体培养基上的菌落外观不是典型的“煎蛋”样子。絮状支原体大小和形状不是固定不变的,特别是在生长后期。在生长稳定和趋向下降阶段,可发现细丝状细胞,这种细胞形状在猪肺炎支原体中不存在。

由于絮状支原体不引起疾病,虽然在猪群中分布广泛,但检测方法很少,主要还是体外培养法,耗时较长。使用PCR法可以对絮状支原体进行检测,灵敏度高,且检测时间短,仅需几个小时即可获得结果。

絮状支原体PCR检测试剂盒选取了16S rRNA基因的一段序列进行PCR鉴定,引物经BLAST验证为特异性靶向絮状支原体,与其他生物的基因组无交叉反应。使用本试剂盒检测了絮状支原体、猪肺炎支原体、猪滑液支原体(Mycoplasma Hyosynoviae)和猪鼻支原体(Mycoplasma Hyorhinis)等共19个菌株和分离株,只有絮状支原体产生特异性扩增条带。可见本试剂盒具有物种特异性,可用于絮状支原体的鉴定和检测。













絮状支原体PCR检测试剂盒【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

组织:取50mg左右组织用玻璃匀浆器匀浆,匀浆后置入洁净的1.5ml离心管中;
液体标本:取适量标本13000rpm离心2min,弃上清。
1.2 DNA提取

1) 对上述处理好的标本加入40ul 核酸提取液,100℃恒温处理10分钟,13,000 rpm离心5分钟,取上清液转移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 试剂配制(试剂准备区)

根据代检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1

管阴性对照+1管阳性对照),体系配制如下表:

试剂

WSSV 反应液

酶液

用量(样本数为N)

20μl

1μl

3. 加样(样本处理区)

将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μl,加入相应的

反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;

5. 结果分析判定

絮状支原体PCR检测试剂盒结果分析条件设定
设置基线(baseline):一般情况下,对ABI 7500、7700等仪器设为6-15cycle,对PE5700设为3-15cycle,对MJ Research Option2设为6-12cycle。特殊情况可对基线适当调整。
设置阈值(threshold):以阈值线刚超过阴性对照扩增曲线(无规则的噪音线)的zui高点。
结果判断
阳性:检测样本Ct值小于等于35.0,且曲线有明显的指数增长期;
可疑:检测样本Ct值大于35.0且小于40.0,重复一次实验,如果Ct值仍小于40.0,且曲线有明显的指数增长期,为阳性,否则为阴性;
阴性:检测不到样本Ct值或Ct值为40。

试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。.