【产品名称】

商品名称：禽呼肠孤病毒(ARV)检测试剂盒（荧光-PCR法）

【包装规格】50 份/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测的血清或血浆、疑似污染 REV 的活病

毒疫苗等标本中禽网状内皮组织增殖病病毒 RNA，适用于禽网状内皮组织增殖病病

毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

禽呼肠孤病毒(ARV)检测试剂盒（荧光-PCR法）【检验原理】

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

水样便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

水样便 13000rpm 离心 2min，去尽上清；疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；疑似污染的水直接取 100μL

1.2 DNA 提取

1) DNA 的提取也可以采用DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

本试剂盒用一对禽网状内皮组织增殖病病毒特异性引物，结合一条特异性荧光

探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对禽网状内皮组织增殖病病毒 RNA 进行体外扩

增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称 规 格

酶液 50μl×1 管

REV 反应液 1.0ml×1 管

REV 阳性质控品 50μl ×1 管

阴性质控品 250μl ×1 管

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

禽呼肠孤病毒(ARV)检测试剂盒（荧光-PCR法）结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

1.2 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道 35 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35 值≤38， 且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

2. 质控标准

阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程， 通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

【注意事项】

? 所有操作严格按照说明书进行；

? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

? 反应液应避光保存；

? 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

? 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

? 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。