【产品名称】

商品名称：禽传染性法氏囊病毒(IBDV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

【包装规格】50 份/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测的血清或血浆、疑似污染 REV 的活病

毒疫苗等标本中禽网状内皮组织增殖病病毒 RNA，适用于禽网状内皮组织增殖病病

毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

禽传染性法氏囊病毒(IBDV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)【检验原理】

本试剂盒用一对禽网状内皮组织增殖病病毒特异性引物，结合一条特异性荧光

探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对禽网状内皮组织增殖病病毒 RNA 进行体外扩

增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

名 称 规 格

酶液 50μl×1 管

REV 反应液 1.0ml×1 管

REV 阳性质控品 50μl ×1 管

阴性质控品 250μl ×1 管

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

1.1 结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

1.2 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道 35 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35 值≤38， 且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。

2. 质控标准

阴性质控品：Ct 值>38 或无 Ct 值；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数 个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

 

 

【注意事项】

? 所有操作严格按照说明书进行；

? 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

? 反应液应避光保存；

? 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

? 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

? 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

? 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

? 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。

禽传染性法氏囊病毒(IBDV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行；
试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；
反应液应避光保存；
反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。.