产品分类
  • 隐藏 查看更多产品
联系方式
  • 联系人:李小姐
  • 电话:021-20421762
  • 传真:021-68969289
  • 手机:15001863771
  • 邮箱:869248833@qq.com
  • 地址:上海市,懿行路971弄
 > 
 > 
(CCK-8)细胞增殖及毒性检测试剂盒
(CCK-8)细胞增殖及毒性检测试剂盒
起批量( 价格
≥1 ¥3元/盒
  • 供货能力:100
  • 最低订购量:1盒
  • 可销售总数量:100盒
  • 发布日期: 2019-07-18
  • 更新日期: 2019-07-18
产品详细说明
品牌: 上海沪峥 产地: 国产
英文名称: Cell Counting Kit-8 保存条件: 2-8
货号: HZZ028-3 保质期: 一年 个月

Cell Counting Kit-8(简称CCK-8),是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。 

CCK-8试剂中含有WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐)是一种类似于MTT的化合物,它在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)存在条件下,可以被线粒体内的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物Formazan (参考图1),生成的Formazan数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析,细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。

保存条件:4℃避光保存,一年有效。-20℃可以储藏两年,但反复冻融会增加背景值,干扰实验测定,因此请将经常使用的试剂保存在4 ℃。 

操作事项:请参阅说明书

产品优势 

灵敏度高,线性范围宽,数据可靠,重现性好

操作简便,省时省力

水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞

无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低

为1瓶溶液,毋需预制,即开即用

适合于高通量药物筛选

检测效果与国外品牌相媲美


注意事项

 

建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

 CCK-8 反应时间的确定:一般情况下,白细胞显色比较困难,因此需要增加细胞数量和延长 CCK-8 反应时间。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色,因此悬浮细胞在加入 CCK-8 培养0.5-4小时后,可先从培养箱取出,目测或用酶标仪测定显色程度,若显色困难可以继续培养数小时后再确定。对于贴壁细胞,CCK-8 的培养时间一般为 0.5-4 小时,在培养 20 分钟左右即可取出肉眼观察显色程度。

每孔接种细胞数:当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔 (100 μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2500个/孔 (100 μl培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

设定空白对照:在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度作为空白对照。

影响CCK-8测定的物质:由于CCK-8检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应,所以如果待测体系中存在氧化还原物质则可能会干扰检测结果,还原性物质会使吸光度增加,氧化性物质会使吸光度减小,因此应需设法去除这些物质的影响。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响,培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除只含有培养基的对照孔中本底吸光度而消除,因此不会对检测结果造成影响。

测定波长:如果样品为高浑浊度的细胞悬液,建议采用双波长进行测定,检测波长450nm,参比波长600-650nm。如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片,但是450nm检测灵敏度*。

当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。

如果细胞培养时间较长,培养基颜色发生变化,应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8检测。

为了您的安全和健康,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。