上海沪峥专业生产销售禽白血病病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户咨询认购。

产品详细信息

名称：禽白血病病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒

规格： 20T/50T

品牌：上海沪峥

【用途】 用于禽白血病病毒的检测、诊断和流行病学调查。

【操作步骤】

1.RNA提取 

(1) 取疑似病料（羽髓组织、*、肿瘤、血液等）1~4g于无菌研钵，研磨并用PBS液稀释成1：3乳剂，分装1.5ml灭菌EP管，反复冻融2~3次，8000r/min离心5分钟。（病毒培养液，只需冻融1次即可8000r/min离心5分钟）

（2）取200uL上清液（或标准品Ｔ），移入新的1.5mL灭菌EP管中，加入200uLSR-I，漩涡振荡混合均匀，静置5min。

（3）加75uL TU-1，漩涡振荡混合均匀，10000r/min离心5 min。

（4）将上清转移到新的2 ml离心管（试剂盒内提供）中，加入300 uL 异丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均匀。

（5）将步骤4中的混合液移入制备管中，并将制备管置于同一2 ml离心管，10000 r/min离心1min。

（6）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加500 uL SR-II，室温静置1min，10000 r/min离心1 min。

（7）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min离心1 min。

（8）将制备管置回到2 ml离心管中，10000 r/min离心1 min。

（9） 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中（试剂盒内提供），在制备管膜中央加40 uL TU-2， 室温静置1 min。10000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板，即用或-70℃冻存备用。

 3 .PCR操作 

4.电泳

配制1%琼脂糖凝胶，取PCR产物5uL混合1uL TU-8，加样于凝胶孔中，同时在相邻孔加3uLTU-7，在120v 电压下，1×TAE液中电泳15分钟，在紫外成像仪下观察结果。

1    2     3   

【结果判定】如果为禽白血病病毒感染阳性，则有约764bp目的条带，如果为禽白血病病毒感染阴性，则无目的条带。

1.       阳性扩增；

2.       阴性对照；

3.       DL2000

禽白血病病毒一步法RT-PCR诊断试剂盒

【注意事项】

1. 每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。

2. 所有试剂在要求温度下保存，-20℃保存试剂尽量减少反复冻融，使用后的试剂立即放回，避免在室温搁置太久。

3. 尽量建立PCR试验操作区，避免交叉污染。

4. 加样和反应程序严格按照说明书进行，由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况，不予负责。

5. 吸头、离心管和PCR管在使用前，要高压灭菌，操作过程尽量不要用手接触到管内壁，可用镊子夹取。

6. 注意防止试剂污染，在有效期限前用完。