上海沪峥专业生产销售鸡传染性支气管炎一步法RT-PCR诊断试剂盒现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户咨询认购。

产品详细信息

名称：鸡传染性支气管炎一步法RT-PCR诊断试剂盒

规格： 20T/50T

品牌：上海沪峥

用途】 用于鸡传染性支气管炎病毒病的检测、诊断和行病学调查。

【操作步骤】1.RNA提取 

 (1) 取疑似鸡传染性支气管炎病的病料（*、肺或尿液）1~4g于无菌研钵，研磨并用Hanks液或PBS稀释成1：4剂，分装1.5 mL灭菌EP管，反复冻融2~3次，8000r/min,心5分钟。

（2）取200uL上清液（或标准品Ｔ），移入新的1.5mL灭菌EP管中，加入200uLSR-I，漩涡振荡混合均匀，静置5min。

（3）加75uL TU-1，漩涡振荡混合均匀，10000r/min离心5 min。

（4）将上清转移到新的2 ml离心管（试剂盒内提供）中，加入300 uL 异丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均匀。

（5）将步骤4中的混合液移入制备管中，并将制备管置于同一2 ml离心管，10000 r/min离心1min。

（6）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加500 uL SR-II，室温静置1min，10000 r/min离心1 min。

（7）弃滤液，将制备管置回到2 ml离心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min离心1 min。

（8）将制备管置回到2 ml离心管中，10000 r/min离心1 min。

（9） 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中（试剂盒内提供），在制备管膜中央加40 uL TU-2， 室温静置1 min。10000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板，即用或-70℃冻存备用。

3 .PCR操作 

4.电泳

配制1%琼脂糖凝胶，取PCR产物5uL混合1uL TU-8，加样于凝胶孔中，同时在相邻孔加3uLTU-7，在120v 电压下，1×TAE液中电泳15分钟，在紫外成像仪下观察结果。

M     1

【结果判定】

    在约440bp位置出现扩增带，实验结果为阳性

鸡传染性支气管炎一步法RT-PCR诊断试剂盒

【注意事项】

1. 每次使用，开盖之前请先瞬时离心，使试剂沉于管底。

2. 所有试剂在要求温度下保存，-20℃保存试剂尽量减少反复冻融，使用后的试剂立即放回，避免在室温搁置太久。

3. 尽量建立PCR试验操作区，避免交叉污染。

4. 加样和反应程序严格按照说明书进行，由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况，不予负责。

5. 吸头、离心管和PCR管在使用前，要高压灭菌，操作过程尽量不要用手接触到管内壁，可用镊子夹取。

6. 注意防止试剂污染，在有效期限前用完。

传统PCR对基因的检测只能定性，不能定量主要是由扩增产物积累的动力学所决定的：①PCR产物在扩增过程中呈指数积累，当产物增加到一定程度，产物就停止了指数积累。不同起始模板，其指数增长期所用的循环是不同的，因此，不同数量基因的样品在同一循环次数中积累的产物不能作为样品基因定量的依据；②PCR产物积累到一定程度就不能再增加，再进入平台期。为了扩大PCR检出的灵敏度通常要增加循环次数，循环次数增加使得样品目的基因含量高的反应管已进入平台期，终产物量并不代表样品目的基因含量；③PCR反应的管间扩增效率差异总是存在的，既然PCR产物呈指数增长，由扩增效率差异引起的产物扩增差异也呈指数积累，增加循环次数势必增加终产物的差异，而减少循环次数又降低了检测的灵敏度。FQ-PCR采用实时检测，使所有含有不同数量的目的基因均在同一条件（达到荧光阈值）下进行分析，因而更具有可比性。而且，这一条件处于扩增产物指数积累初期，合成产物所需的dNTP、酶、离子均处于饱和的*状态，所以FQ-PCR循环参数与起始模板间有良好的线性关系（相关系数＞0.95），实现了极为精确的基因定量检测。