- 上海沪峥生物科技有限公司
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- 地址:上海市,懿行路971弄
- 品牌:上海沪峥
- 产地:国产
- 货号:HZ-75235
- 价格: ¥3/盒
- 发布日期: 2016-12-06
- 更新日期: 2024-04-19
产地 | 国产 |
品牌 | 上海沪峥 |
货号 | HZ-75235 |
用途范围 | 仅限科研,不用于临床 |
纯度 | 详询客服% |
规格 | 20T/50T |
上海沪峥专业生产销售猪蓝耳病(变异毒)一步法RT-PCR诊断试剂盒现货,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户咨询认购。
产品详细信息
名称:猪蓝耳病(变异毒)一步法RT-PCR诊断试剂盒
规格: 20T/50T
品牌:上海沪峥
【操作步骤】
1.RNA提取
(1) 取疑似鸭病毒性肝炎的病料(*、*、淋巴结等)1~4g于无菌研钵,研磨并用PBS液(pH7.2~7.4)稀释成1:4乳剂,分装1.5ml灭菌EP管,反复冻融2~3次,8000r/min离心5分钟。(病毒培养液,只需冻融1次即可8000r/min离心5分钟)
(2)取200uL上清液(或标准品T),移入新的1.5mL灭菌EP管中,加入200uLSR-I,漩涡振荡混合均匀,静置5min。
(3)加75uL TU-1,漩涡振荡混合均匀,10000r/min离心5 min。
(4)将上清转移到新的2 ml离心管(试剂盒内提供)中,加入300 uL 异丙醇(1%冰乙酸),上下倒置6-8次,混合均匀。
(5)将步骤4中的混合液移入制备管中,并将制备管置于同一2 ml离心管,10000 r/min离心1min。
(6)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加500 uL SR-II,室温静置1min,10000 r/min离心1 min。
(7)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加700 uL SR-Ⅲ,10000 r/min离心1 min。
(8)将制备管置回到2 ml离心管中,10000 r/min离心1 min。
(9) 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中(试剂盒内提供),在制备管膜中央加40 uL TU-2, 室温静置1 min。10000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板,即用或-70℃冻存备用。
3 .PCR操作
4.电泳
称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25mL 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1.5uL的TU-8混匀。封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物5uL混合1uL TU-7,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加3uLTU-6,在120v 电压下,1×TAE液中电泳15分钟,在紫外成像仪下观察结果。
【结果判定】
如果为蓝耳病毒感染阳性,会有两种电泳结果,一种为目的
片段低于500 bp(约470bp),为蓝耳病毒变异株感染(Nsp2
基因缺失);另一种结果为出现大于500bp片段(约为560bp),
为Nsp2基因未发生缺失的猪蓝耳病毒感染。
在450bp位置出现扩增带,实验结果为阳性
猪蓝耳病(变异毒)一步法RT-PCR诊断试剂盒
【注意事项】
1. 每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。
2. 所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久。
3. 尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染。
4. 加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误、移液器不精确、定时不准确造成无结果情况,不予负责。
5. 吸头、离心管和PCR管在使用前,要高压灭菌,操作过程尽量不要用手接触到管内壁,可用镊子夹取。
6. 注意防止试剂污染,在有效期限前用完。