PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒说明书

发布时间： 2016-06-30   

PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒说明书

 

PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来精确定量样品中DNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、 成功实验证明的。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严 格无菌，即到即用，性能稳定，高度敏感。

 

技术背景:

作为 DNA 染色剂之一的 PicoGreen 荧光染料特异性地与样品中双链 DNA 结合，产生荧光信号。PicoGreen 技术可以检测到低达 0.5 纳克双链 DNA 的变化。DNA 的微量增加引起荧光信号强度（Intensity）或相对荧 光单位（RFU）的显著增加。其自发荧光（Autofluorescence）忽略不计，重复性标准差异（Standard       Deviation） 低，不受样品化学成分的干扰。

 

产品内容：

染色液（Reagent A）  微升

稀释液（Reagent B）  毫升

标准液（Reagent C）  毫升

产品说明书 1 份

 

保存方式：

保存 染色液（Reagent A）和 标准液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里， 染色液（Reagent A）避免光照，有效保证6个月

用户自备1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器比色皿或 96 孔板：用于荧光分析的容器 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析

 

PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒实验步骤：

 

一、 测定准备：

1．准备好待测样品，置于冰槽里

2．设定好荧光分光光度仪（温度为 37℃）：激发波长 480nm，散发波长 530nm，并置零

3．实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出 xx 毫升 稀释液（Reagent B）到新的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升 染色液（Reagent A），混匀后，用锡纸包裹，标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

 

二、 构建标准曲线：

1．准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管

2．分别加入 xx 微升 稀释液（Reagent B）到每个离心管

3．移取 xx 微升 标准液（Reagent C）到 1 号管，混匀

4. 小心移取 xx 微升 1 号管稀释的 标准液（Reagent C）到 2 号管，混匀

5．小心移取 xx 微升 2 号管稀释的 标准液（Reagent C）到 3 号管，混匀

6. 小心移取 xx 微升 3 号管稀释的 标准液（Reagent C）到 4 号管，混匀

7．将 1 至 5 号管放进冰槽里备用；标准管含量见下表：

 

管号	缓冲液（Reagent B）	标准液（Reagent C）	标准 DNA 总量
1	xx 微升	xx 微升	xx 微克
2	xx 微升	xx 微升 1 号管	xx 微克
3	xx 微升	xx 微升 2 号管	xx 微克
4	xx 微升	xx 微升 3 号管	xx 微克
5	xx 微升	空对照	0

 

8．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀释液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿

9．加入 500 微升上述配制的标准液

10．室温下，孵育 5  分钟，避免光照

11．即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative   Fluorescence    Unit；RFU）

12.重复实验步骤 8 至 11 四次

13.绘制标准曲线：纵座标（Y  轴）为相对荧光单位（RLU）；横坐标（X  轴）为 DNA  含量（微克）

 

三、 样品检测

1．移取 xx 微升含有 染色液（Reagent A）和 稀释液（Reagent B）的 染色工作液到新的比色皿

2．加入 500 微升待测样品

3．室温下，孵育 5 分钟，避免光照

4.即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative   Fluorescence   Unit；RFU）

5．根据标准曲线获得样品对应 DNA 含量（微克）

6．样品实际 DNA 浓度：

 

PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒注意事项：

1．本产品为 20 次（比色皿）和 100 次（96 孔板）操作，包括标准曲线测定

2．操作时，须戴手套

3．使用新鲜配制的 染色工作液，务必不要超过 2 小时，且注意避光

4．建议使用塑料管配制 染色工作液，而不是玻璃制品

5．孵育时，避免光照

6．系统检测，标准曲线测定 1 次即可；如果仪器更换，则需要重新测定 1 次

7．如果荧光读数过高，可以相应稀释样品量

8．可以使用荧光酶标仪检测，试剂用量和体系均除以 5，包括标准 DNA 含量，其计算公式[根据标准曲线获得样品对应DNA  浓度（微克）X样品稀释倍数]÷0.1（样品容量；毫升）＝微克/毫升

9．盐类、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链 DNA 和 RNA 不会干扰检测

10.本公司提供系列DNA检测试剂产品

 

质量标准：

1．本产品经鉴定性能稳定

2.本产品经鉴定高度敏感

 

使用承诺:

上海沪峥秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。